宋宇静，李琳琳，张会玲
（济南市章丘区农业局， 山东济南 250200）
摘要：本试验主要以柑橘绿霉病菌为靶标菌，采用平板对峙法检测解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）抑菌活性，并检测其无细胞滤液的抑菌效果，无细胞滤液利用摇瓶发酵后经微孔滤膜过滤制备, 采用菌落生长速率法确定其抑菌效果。
关键词：解淀粉芽孢杆菌；柑橘青绿霉病菌；抗菌活性
1研究的目的及意义
有些微生物在生长过程中能产生抑制真菌的分泌物，这就为利用微生物抑制植物病原真菌，防止植物真菌病害提供了新的可能[1]。芽孢杆菌能产生多种抑菌物质，且对人畜无害，不污染环境，常用于防治多种植物病害，因而在生物防治植物病害中起着重要的作用。有关芽孢杆菌的控病作用机制，国内外学者从各个角度进行了广泛探讨，概括起来主要有竞争、拮抗、诱导植物抗病性和促进植物生长等几个方面[2]。芽孢杆菌的竞争作用主要包括营养竞争和空间位点竞争，即在植物根际、体表或体内及土壤中快速、大量繁衍和定殖，有效地排斥、阻止和干扰植物病原微生物在植物上的定殖与侵染，从而达到抑菌控病效果。拮抗作用主要指两种或两种以上的微生物共同生长时，一种微生物在同化作用中产生某种或某几种特异的次生代谢产物(如抗菌素等抗菌物质)，改变其微环境，从而抑制甚至杀死另一种微生物的现象。芽孢杆菌可产生抗生素、细菌素、细胞壁降解酶类和其它抗菌蛋白及挥发性抗菌物质等拮抗物质[3]。
2试验方法
2.1 柑橘绿霉病病原菌的分离及鉴定
采用无菌操作，用接种针从感病柑橘中挑取少量皮下果肉接种在配制好的PDA培养基上分离培养并纯化后，得单一菌种，25 ℃恒温培养并定期观察菌落的颜色和形状。
绿霉病病原菌属半知菌亚门丝孢纲。绿霉病病原菌的分生孢子梗无色，先端具1～2 个分枝，扫帚状，小梗中部稍宽，上下端稍狭细，呈细长纺锤状，其上串生分生孢子，分生孢子单孢无色，卵形，较大。经显微镜观察，所纯化菌种符合以上特征，因此确定分离的病原菌是绿霉病病原菌。
2.2解淀粉芽孢杆菌PEBA20菌活体对柑橘绿霉病菌菌落生长的抑制作用
抑制率（%）=[（对照菌落半径—处理菌落半径）/对照菌落半径]×100
2.3解淀粉芽孢杆菌PEBA20发酵液对柑橘绿霉病菌孢子萌发的抑制作用
孢子萌发抑制率（%）= [（对照孢子萌发率-处理孢子萌发率）/对照孢子萌发率]×100
3试验结果
3.1 解淀粉芽孢杆菌PEBA20菌活体对柑橘绿霉病菌菌落生长的抑制作用结果
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CK菌落半径（mm）
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均值（mm）
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处理组菌落半径（mm）
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被抑制菌落半径（mm）
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抑制率%
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平均抑制率%
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1
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34.5
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32.26
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8.8
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23.46
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72.72
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69.62
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2
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31.0
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10.1
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22.16
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68.69
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3
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31.3
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10.5
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21.76
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67.45
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4
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9.8
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22.46
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69.62
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解淀粉芽孢杆菌PEBA20对柑橘绿霉病菌有较强的抑制作用，菌落被抑制边缘菌丝颜色加深，呈铁锈色，出现抑菌带，白色菌丝层稀少。
3.2解淀粉芽孢杆菌PEBA20对柑橘绿霉病菌菌丝生长的致畸作用
解淀粉芽孢杆菌PEBA20
产生的抗生物质使菌丝的正常生长受到抑制，菌丝的生长速率明显减慢，同时菌丝产生了一些畸变形态，主要变现为：菌丝分支增多、菌丝细胞间距变小、原生质浓缩菌丝颜色加深。
3.3 解淀粉芽孢杆菌PEBA20发酵液对柑橘绿霉病菌孢子萌发的抑制作用结果
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CK
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发酵液处理
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萌发的孢子数量（个）
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未萌发的孢子数量（个）
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萌发率（%）
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平均萌发率（%）
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萌发的孢子数量（个）
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未萌发的孢子数量（个）
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萌发率（%）
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萌发抑制率（%）
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平均萌发抑制率（%）
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1
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291
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25
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92.09
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93.25
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116
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127
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47.74
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48.80
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59.02
|
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2
|
283
|
23
|
92.48
|
95
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204
|
31.77
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65.93
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3
|
335
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17
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95.17
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105
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194
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35.12
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62.33
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经过预实验可知柑橘绿霉病菌孢子萌发的高峰期在14h，孢子萌发率达到90%以上， PEBA20发酵液对柑橘绿霉病菌孢子萌发的抑制率达到59.02，致畸作用不明显，显微镜下没有观察到异常萌发的孢子形态。这说明PEBA20发酵液对柑橘绿霉病菌孢子萌发的抑制作用不明显，可能只是延缓了孢子萌发的进程。
4结论
解淀粉芽孢杆菌PEBA20对柑橘绿霉病菌菌丝的生长有较好的抑制作用，能够明显抑制病原菌菌落的生长。
本文来源：《新农民》杂志/期刊
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